高压脉冲电场提取蛋黄卵磷脂的高纯度方法

卵磷脂（lecithin）又称磷脂酰胆碱，是一种广泛分布在动植物中的磷脂类生理活性物质。卵磷脂是人体生物膜的基础构成物质，有极高的营养和医学价值，具有延缓衰老、提高大脑活力、防治动脉硬化、解除心脑血管疾病、预防脂肪肝、滋润皮肤等多种生理功能，同时还具有很好的乳化作用和抗氧化性能。因此，卵磷脂在医药、食品、化妆品等行业的应用十分广泛。近20年来，我国蛋黄卵磷脂的研究和应用取得了较大进展，下面介绍几种蛋黄卵磷脂的提取方法。

一、有机溶剂法提取蛋黄卵磷脂

有机溶剂分离技术是一种传统的分离提纯卵磷脂的方法，是根据蛋黄中各组分在不同溶剂中的溶解度差异进行分离的。

（一）工艺流程（见图3-6-1）

图3-6-1 有机溶剂法提取蛋黄卵磷脂工艺流程

（二）操作要点

（1）有机溶剂选择。分离所选用的有机溶剂一般为石油醚、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。

（2）有机溶剂萃取。称取一定量的均质鸡蛋蛋黄（去蛋清）于洁净的带塞三角锥形瓶中，加入一定量的乙醇，用强力电动搅拌器搅拌30min后静置一定时间，加入乙醇用量1/3的乙醚，搅拌15min，静置相同时间后过滤，滤渣进行二次萃取，加入乙醇-乙醚混合液（体积比3∶1），搅拌静置相同时间，二次过滤。

（3）分离。合并两次滤液，低温减压浓缩后，加入一定量丙酮除杂，卵磷脂沉淀，然后过滤，滤饼用丙酮冲洗，直到冲洗液无色。

（4）干燥。在真空干燥箱中干燥，充入氮气后称量，计算提取率。

使用极性-非极性混合溶剂比使用单一溶剂效果好，避免温度过高而失去生理活性。(www.zuozong.com)

二、层析法提取蛋黄卵磷脂

西北大学赵彬侠研究了吸附柱层析制备高纯度卵磷脂的方法，其提取技术要点：取73kg蛋黄，用9L乙醇萃取两次，接着用乙醇-己烷混合液萃取3次（体积比分别为3∶4、2∶4和15∶35），分离己烷上清液，通过硅胶柱，用乙醇-己烷-水（体积比为60∶30∶120）洗脱，可获卵磷脂含量高于97%的产品。另有资料报道，15cmX40cm 的色谱柱，以硅胶为吸附剂，用梯度差为V（CH3 OH）∶V（CHCl3）=1∶2～2∶1的甲醇/氯仿混合液（p H3～4）进行凹型梯度洗脱，可以对卵磷脂进行分离，洗脱剂仅为柱休积的5～6倍，洗脱时间仅为6h。专利报道将粗磷脂200g溶于2L热甲醇中，冷却，取上清液，用25L 80%的甲醇溶液稀释，过XAD-2型离子交换柱，柱温保持20℃，用4.65L 90%的甲醇溶液洗脱，可获得高纯度的卵磷脂。

三、金属离子沉淀法提取蛋黄卵磷脂

卵磷脂可与金属离子发生配合反应，形成配合物，生成沉淀。利用此性质把卵磷脂从有机溶剂中分离出来，由此除去蛋内质、脂肪等杂质，再用适当溶剂分离出无机盐和磷脂杂质（主要是脑磷脂、鞘磷脂），提高卵磷脂纯度。CaCl2、MgCl2、ZnCl2 均可与卵磷脂发生配合反应形成复合盐，但CaCl2 和MgCl2 提取卵磷脂较低，且毒性较大，所以ZnCl2 较理想的沉淀剂。

赵彬侠（2003年）研究的用ZnCl2 乙醇纯化卵磷脂的具体方法：将100g粗卵磷脂溶于1L 95%的乙醇中，再加入45g ZnCl2，生成淡黄色卵磷脂ZnCl2 复合盐沉淀，离心分离此沉淀物，在氮气保护下，用25m L冰丙酮与沉淀物混合，搅拌1h，可得到含量高达99.5%的卵磷脂。

四、膜分离法提取蛋黄卵磷脂

膜分离法提取蛋黄卵磷脂主要是利用膜对组分的选择透性而将特定组分分离出来，半透 膜上分布着一定孔径的大量微孔，通过膜的组分以膜两侧的浓度梯度为推动力进入膜的另一侧，利用膜的这种被动传递形式将组分分离。粗卵磷脂中含有一定量的蛋白质、中性脂肪、脑磷脂、鞘磷脂等杂质，它们的粒度大小、分子质量与卵磷脂有较大区别，通过半透膜的难易程度不同，由此卵磷脂得以分离。

用己烷-异丙醇混合溶剂溶解的粗磷脂通过聚丙烯半透膜，收集流过膜的溶液，蒸发溶剂，可使粗卵磷脂得到纯化。日本也在试验应用膜分离技术制备高纯度卵磷脂，将磷脂溶于溶剂中，形成微胶囊，根据不同分子质量进行膜分离，得到不同分子质量的磷脂组分，从而制得高纯度卵磷脂产品。

五、超临界CO2 萃取提取蛋黄卵磷脂

首先将蛋黄粉装入萃取器，将液态CO2 经泵送入汽化器，形成所需要的超临界状态，处于超临界状态的CO2 经过蛋黄粉床时，胆固醇和甘油三酯便溶解在其中，进入分离器后，通过降低压力破坏它的溶解条件，胆固醇和甘油三酯与CO2 分别聚集在分离器中，而CO2 经过冷凝器变为液体进入液态贮罐，这样密闭循环数小时后，蛋黄粉中的胆固醇和甘油三酯便被萃取掉，所余物质即为含有卵黄蛋白和磷脂的粗蛋黄卵磷脂。

六、有机溶剂结合高压脉冲电场提取蛋黄卵磷脂

有机溶剂结合高压脉冲电场可提取蛋黄粉卵磷脂，蛋黄粉的主要成分为蛋黄卵磷脂（质量分数17%左右）、中性脂质（蛋黄油，主要成分为甘油三酯和胆固醇，质量分数＞40%）和卵黄蛋白（质量分数＞40%）。研究表明，高压脉冲电场处理蛋黄粉，而后采用有机溶剂萃取的方法，能够提取出高纯度、低变性、高产量卵磷脂成品。